3 nov 2021

DETECCIÓN DE GRAFENO EN VACUNAS COVID19 POR ESPECTROSCOPÍA MICRO-RAMAN

 

DETECCIÓN DE GRAFENO EN VACUNAS COVID19 POR ESPECTROSCOPÍA MICRO-RAMAN

 

 

 

 

 

 

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INFORME TÉCNICO

 

 

Almería, España, 2 de noviembre de 2021

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Prof. Dr. Pablo Campra Madrid PROFESOR TITULAR DE UNIVERSIDAD

Doctor en Ciencias Químicas Licenciado en Ciencias Biológicas


RESUMEN

 

 

El objetivo del siguiente trabajo ha sido realizar un muestreo de señales espectrales de vibración RAMAN que, asociadas a imágenes de microscopia óptica acoplada a los espectros, permita determinar la presencia de derivados de grafeno en muestras de vacunas COVID19 comercializadas bajo cuatro marcas diferentes.

Se han analizado más de 110 objetos visibles al microscopio óptico con apariencia compatible con estructuras de grafeno, de los cuales se seleccionado para el presente informe un total de 28 objetos por su compatibilidad con la presencia de grafeno o derivados en las muestras, tiendo en cuenta la correspondencia entre sus imágenes y señales espectrales con los obtenidos de una muestra patrón y de la literatura científica.

De estos 28 objetos, en 8 de ellos la identidad del material con oxido de grafeno es concluyente por la elevada correlación espectral con el patrón.

Los restantes 20 objetos presentan una compatibilidad muy elevada con estructuras de grafeno, teniendo en cuenta conjuntamente tanto sus espectros como su imagen óptica.

La investigación continúa abierta y se pone a disposición de la comunidad científica para su discusión y replicación y optimización.


DESCARGO DE RESPONSABILIDAD

 

 

La presente investigación ha sido realizada exclusivamente por el Dr. Pablo Campra, sin ningún tipo de retribución por parte de entidad privada o pública alguna, ni implicación o conformidad a sus resultados y conclusiones por parte de la institución donde está afiliado.

La caracterización de los objetos relacionados corresponde en exclusiva a las muestras analizadas. No es posible sin un muestreo significativo conocer si estos resultados son generalizables a otras muestras de similares marcas comerciales.

El Dr. Pablo Campra sólo se responsabiliza de las afirmaciones redactadas en este archivo firmado electrónicamente, no siendo responsable de las opiniones o conclusiones que del mismo pudieran extraerse en su divulgación en medios y redes sociales no expresadas en el presente documento, cuya versión original autentificada y firmada electrónicamente puede consultarse en la plataforma Researchgate: https://www.researchgate.net/publication/355684360_Deteccion_de_grafeno_en_va cunas_COVID19_por_espectroscopia_Micro-RAMAN


1. METODOLOGÍA ANALÍTICA

 

    Fundamento de la técnica micro-Raman

Debido a las características de la muestra y en particular a la dispersión de objetos con apariencia grafénica de tamaño micrométrico en una matriz compleja de composición indeterminada, la aplicación directa de métodos espectroscópicos no permite caracterizar los objetos problema sin una previa localización o fraccionamiento de la muestra original. Por ello se seleccionó la microscopía acoplada a espectroscopía RAMAN (micro-RAMAN) como técnica eficaz para una prospección exhaustiva de los objetos micrométricos visibles al microscopio óptico.

La espectroscopia de infrarrojo RAMAN es una técnica rápida, no destructiva, que permite la verificación de la estructura del material mediante la identificación de modos vibracionales y fonones generados tras la excitación con láser monocromático, generando dispersión inelástica que se manifiesta en picos de emisión infrarroja característicos de la estructura reticular del grafeno y derivados. La microscopía óptica acoplada permite enfocar el láser de excitación a objetos concretos y puntos localizados en los objetos y reforzar el grado de confianza en la identificación de la naturaleza del material, y complementariamente obtener información de grosor, defectos, conductividad térmica y geometría de borde de las mallas cristalinas de grafeno.

Modos vibracionales RAMAN de grupos funcionales frecuentes O-P-O 813 cm-1

C-C   800 (600-1300) cm-1

C-O-C 800-970 cm-1 Raman media

C-(NO2) 1340-1380 cm-1 Raman fuerte; 1530-1590 cm-1   (asimétrica) Raman medio

C=C vibraciones en anillos aromáticos (ej Grafeno, grafito) (Otto, 1984) 1580-1600 cm-1 : Señal Raman fuerte

1450, 1500 cm-1 : señal Raman media

-CH2- 1465 cm-1    doblamiento en plano H-C-H (scissoring)

C=N 1610-1680 cm-1 (bases nitrogenadas)

C=0 carbonilo 1640, 1680-1820 cm-1

C-H 3000 cm-1

O-H 3100-3650 cm-1


                  Equipo para espectroscopía micro-Raman

 




 

 

ESPECTROMETRO LASER RAMAN JASCO NRS-5100

MICROSCOPIO Raman confocal con espectrógrafo, incluye:

-variedad de aumentos y distancias de trabajo de x5 a x100

-hasta 8 láseres que van desde el UV hasta el NIR

-SRI (imagen de resolución espacial) para ver simultáneamente la imagen de muestra y el punto láser.

-DSF (Filtración espacial dual) que optimiza el enfoque confocal de la imagen producida por la lente del objetivo para reducir la aberración y mejorar la resolución espacial y reducir los efectos de la fluorescencia de la matriz.

Los espectros fueron analizados con software SPECTRA MANAGER, versión 2. JASCO Corporation.

Previamente se calibró el equipo con patrón de silicio a 520 cm-1.

 

 

Parámetros de espectroscopía micro-RAMAN aplicados

Data array type               Linear data array Horizontal axis               Raman Shift [cm-1] Vertical axis               Int.

Start    1200 cm-1

End  1800 cm-1 Data interval 1 cm-1 Data points  601

[Measurement Information] Model Name NRS-5100 Exposure  30 sec

Accumulation 3

Center wavenumber 1470.59 cm-1 Z position       27041.5 µm


Binning Upper143

Binning Lower 202

Valid Channel 1 - 1024 CCD  DV420_OE

Laser wavelength 532.09 nm Monochromator Single

Grating             1800 l/mm

Slit        100 x 1000 um

Aperture  d-4000 um Notch filter  532.0 nm

Resolution               3.69 cm-1, 0.96 cm-1/pixel Objective lens MPLFLN 100 x

BS/DMBS 30/70

1/2 plate  Not fitted Polarization  Not fitted Laser power 4.0 mW Attenuator  Open

CCD temperature  -60.0 ºC Shift  -3.00 cm-1


           Espectroscopía micro-Raman de grafito y grafeno




 

 

1.     BANDAS DE ESTRUCTURA NANOCRISTALINA

 

-Banda G (~1580-1600 cm-1): Indica una vibración permitida del fonón (vibración elemental de la red) en el plano del anillo aromático (hibridación sp2), característica de la estructura cristalina del grafito y grafeno. Presenta un desplazamiento al rojo o red shift (menor frecuencia en cm-1), así como mayor intensidad con mayor número de capas. Al contrario, la mayor energía en grafeno dopado se manifiesta como blue shift (mayor frecuencia en cm-1), a lo largo del rango 1580-1600 cm-1) (Ferrari et al, 2007). En grafito G se presentan más afilado y estrecho que en grafeno.

 

-Banda 2D (~2690 cm) (o G’): Indica orden de apilamiento. Depende del número de capas, no depende del grado de defectos, pero su frecuencia es cercana al doble de la del pico D. Su posición oscila según el tipo de dopado. La presencia de grafeno monocapa (SLG) se ha asociado a la presencia de un pico 2D aislado y afilado, aumentando su anchura con el número de capas (Ni et al., 2008).

 

-  La ratio de I2D/IG es proporcional al número de capas de la malla grafítica

 

-  En grafito G y 2D se presentan más afilados y estrechos que en grafeno.


2.     BANDAS ACTIVADAS POR DEFECTOS en la estructura grafítica.

Se generan por dispersión elástica (misma energía) de transportadores de carga y por el confinamiento del fonón (anomalía de Kohn en la dispersión del fonón).

En óxidos de grafeno (GO) el desorden procede de la inserción de grupos hydroxilo (- OH) y epóxido (-O-).

-Banda D (~1340 cm-1). Manifiesta la densidad de defectos en la malla cristalina por funcionalización, dopaje o anomalías estructurales generan agujeros o nuevos centros sp3 (C-C). La intensidad de la banda D disminuye con el alineamiento de capas en la estructura grafítica

-Banda D’ (~1620 cm-1). Sigue un comportamiento de doble resonancia por defectos en la malla. En ocasiones llega a fundirse con la banda G por blueshift de ésta.

-Banda D+G (~2940 cm-1)

PARÁMETROS QUE INTRODUCEN VARIABILIDAD DE FRECUENCIA (cm-1), INTENSIDAD Y PERFIL DE LAS BANDAS RAMAN

Estos indicadores de variabilidad no han sido objeto de estudio detallado en el presente informe, pero deben de tenerse en cuenta para la asignación de bandas a modos vibracionales.

-       Grado y tipo de desorden (dopaje, roturas, etc.). El desorden aumenta la anchura de los picos G, D, y 2D, la disminuir el tiempo de vida del fonón (vibración molecular)

-       La banda G no muestra diferencias de intensidad por desorden, pero sí varía la relación (ID/IG).

-       Compresión y estiramiento de la malla por dopaje. Puede haber blueshifts (>cm) en todas las bandas (hasta 15 cm −1 en G y 25 cm −1 en 2D) y estrechamientos de banda (hasta 10 cm −1)

ej back gates por dopado con óxidos mediante deposición

-       Por doblamiento de lámina también aumenta la banda 2D, sin cambios en G, pero con blueshifts de entre 4-12 cm −1

-       Nivel de apilamiento o número de capas

-       Funcionalización (introducción de grupos funcionales) de las mallas genera la aparición de nuevos picos Raman: 746 cm−1 (C–S stretching), 524, 1062, 1102,

1130 cm−1 (skeletal vibrations, CCCC trans y gauche), 1294 (twisting), 1440, 1461 (C–H deformation, scissoring), 2848 and 2884 cm−1 (C–H stretching).

-       En un mismo objeto puede haber variaciones espectrales según el ángulo de incidencia y las capas afectadas. Los bordes mostraran más desorden que el núcleo cristalino (Ni et al, 2008)

-       Blueshifts dependientes del sustrato de crecimiento del grafeno (ej SiC) (Chen et al, 2008)

-       Intensidad variable de los picos en el mismo objeto según el punto de focalización del láser, por variabilidad estructural respecto al ángulo de incidencia respecto a la malla cristalina (Barros et al, 2005)


          MUESTRAS ANALIZADAS Y OBJETOS CARACTERIZADOS (VER ANEXOS 1 Y 2)

          PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

1. Las muestras se obtuvieron a partir de viales sellados de las vacunas mRNA COVID19 reseñadas en el anexo 1. Todos los viales estaban sellados en el momento de su procesamiento, excepto MOD y JAN, que no presentaban cierre de aluminio.

2. Se extrajeron mediante micro-jeringa diferentes alícuotas por vial de 10 ul cada una y se depositaron en portaobjetos de microscopia óptica, dejándose secar en campana aséptica de flujo laminar a temperatura ambiente. Seguidamente se custodiaron en estuche portaobjetos cerrado y en frio hasta análisis Raman.

3. Se realizaron inspecciones visuales exhaustivas al microscopio óptico (OLIMPUS CX43) para búsqueda de objetos compatibles con estructuras grafíticas o grafeno. Aumentos de X100 a x60.

Criterios de selección de objetos:

1. Localización en los restos de la gota o en zona exterior de arrastre por secado

2.    Aspecto visual: objetos translucidos bidimensionales o cuerpos opacos oscuros.

4.  Obtención de espectros RAMAN de los objetos seleccionados

5.  Procesamiento de los datos espectrales

La relación y claves de los objetos caracterizados en el presente informe se expone en el anexo 2.


3. RESULTADOS Y DISCUSION

 

(Ver imágenes y espectros de los objetos seleccionados en ANEXO 3: RESULTADOS)

La técnica de micro-Raman aplicada ha resultado ser muy efectiva para la caracterización rápida de un número elevado de objetos microscópicos en la detección de micro-estructuras de grafeno dispersas en muestras complejas. En comparación con la espectroscopía macro-Raman directa de dispersiones acuosas, la combinación con la microscopía tiene la ventaja de poder asociar señales espectrales a objetos visibles al microscopio óptico, lo que permite focalizar la prospección hacia objetos concretos con apariencia grafénica, reforzando su caracterización espectroscópica. En este trabajo, la selección preliminar de objetos se ha centrado en dos tipologías, láminas translúcidas y objetos carbonáceos opacos, por su semejanza visual con formas similares observables en patrones sometidos a ultrasonidos o en dispersiones de óxido de grafeno (ver anexo Resultados). La diferencia entre ambas tipologías no se debe a su composición química, derivada del grafito, sino tan solo al grado de exfoliación del material grafítico de partida y al número de capas superpuestas, pudiéndose establecer 10 capas como el límite para considerar que un material ya es grafito (3D) (Ramos-Fernandez, 2017).

Una vez seleccionados un total de 110 objetos con posible apariencia grafénica, localizados mayoritariamente en el borde de las gotas de las muestras tras su deshidratación, el interior o exterior en la zona de arrastre por secado a temperatura ambiente de la fase acuosa original. Del total de estos objetos, se han seleccionado un total de 28 objetos por su mayor grado de compatibilidad espectral con materiales grafénicos reportados en literatura. Las imágenes y espectros RAMAN de estos objetos se muestran en el anexo 3 de resultados del presente informe. Es de interés notar que a temperatura ambiente las muestras no llegan a secarse por completo, quedando siempre un resto gelatinoso, cuyo límite puede observarse en algunas fotografías mostradas. Se ignora por el momento la composición de dicho medio por no haber sido objeto del presente estudio, así como la de otras tipologías de objetos de tamaño micrométrico que pudieron observarse recurrentemente en las muestras a bajo aumento (40-600X). Los espectros Raman de algunos de estos objetos se obtuvieron, pero no se presentan en este estudio por no mostrar semejanza visual con grafeno o grafito.

Una limitación en la obtención de patrones espectrales definidos ha sido la intensidad de la fluorescencia que emitían muchos objetos observados. En numerosas láminas translúcidas con apariencia grafénica, no fue posible obtener espectros Raman libres de ruido por fluorescencia, por lo que la técnica no permitió la obtención de señales RAMAN especificas con picos bien definidos. Por ello en estos objetos no puede afirmarme ni descartarse la presencia de estructuras de grafeno. Otra limitación de la técnica micro-RAMAN es la baja calidad de la imagen óptica del equipo, que impide detectar con frecuencia láminas semejantes a grafeno de alta transparencia, que pueden observarse sin embargo en microscopios ópticos con ajuste adecuado del condensador. Para estos objetos una alternativa sería emplear otras técnicas


complementarias de microscopía acoplada con espectroscopía, como XPS con buena óptica o difracción de electrones por TEM.

Teniendo en cuenta estos criterios de selección, se han distribuido en 2 grupos los 28 objetos encontrados con posible identidad grafénica, según el grado de correlación con el espectro RAMAN del patrón de óxido de grafeno reducido empleado (rGO, TMDICSA). En el GRUPO 1 se han incluido 8 objetos cuyos patrones espectrales son similares al espectro del patrón rGO, y por tanto puede afirmarse con certeza la presencia de óxido de grafeno (nº 1-8). Esta correspondencia espectral puede considerarse inequívoca, y se caracteriza por 2 picos dominantes en el rango escaneado (entre 1200-1800 cm-1), picos denominados G (~1584 cm-1 ) y D (~1344 cm-1 ), característicos de óxidos de grafeno. Esta caracterización por correspondencia espectral entre las señales de las muestras problema y del patrón rGO viene reforzada por la apariencia microscópica de estos objetos, todos ellos con apariencia opaca carbonácea similar a la de los objetos patrón, como puede verse en las fotografías del anexo de Resultados. Por tanto, podemos afirmar con un elevado nivel de confianza que la identificación de material grafénico en todas las muestras analizadas del Grupo 1 ES CONCLUYENTE, y con alta probabilidad se trata de óxidos de grafeno. Estos objetos del grupo 1 presentaron un tamaño micrométrico en rangos de decenas de micras (mostrado en las fotografías de algunos de ellos por una línea azul).

En el segundo grupo (GRUPO 2, 9-28), se han detectado señales RAMAN compatibles con la presencia de estructuras de grafeno o grafíticas en 20 objetos, al presentar máximos vibracionales RAMAN en torno a la banda G (1585-1600 cm-1), compatibles con el pico G de la estructura cristalina de la malla cristalina de grafito o grafeno. Este modo vibracional se genera por la vibración permitida del fonón en el plano del anillo aromático (sp2). Su desplazamiento hacia mayores frecuencias en algunos objetos, tendiendo hacia 1600 cm-1 (blue shift) puede deberse a muy diversas modificaciones referidas extensamente en la literatura, como, por ejemplo, número de capas de grafeno o dopaje con grupos funcionales o metales pesados entre otros (Ferrari et al, 2007). Visualmente los objetos del grupo 2 pueden presentar los dos tipos de apariencias que se observan en el patrón, tanto como objetos micrométricos opacos con apariencia carbonácea (nº 9, 11, 16, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 y 28) como láminas

translúcidas con apariencia grafénica (nº 10, 12, 13, 14, 18, 19 y 20).

En los espectros de este grupo 2, los máximos del pico G se acompañan de otros picos dominantes de asignación no determinada en este trabajo. Un subgrupo (2.1.) está formado por objetos cuyos espectros presentan los dos 2 picos dominantes situados en rangos de banda que podrían asignarse a los dos modos vibracionales del óxido de grafeno, G (rango 1569-1599 cm-1 y D (rango 1342-1376 cm-1) (objetos nº 11, 14, 15, 16,

17, 20, 21, 22, 23, 24, 25 y 26). Considerando conjuntamente las imágenes microscópicas y las señales RAMAN, la asignación de los espectros de este grupo a estructuras grafénicas puede hacerse con un elevado nivel de confianza, si bien están por determinar las modificaciones estructurales de la malla que generan señales espectrales


que no son idénticas a la del patrón empleado de referencia (rGO), y causan variabilidad en la frecuencia y perfil de estos picos respecto al estándar utilizado.

Un segundo subgrupo (2.2) de objetos de este Grupo 2 (nº 9, 10, 12, 13, 18, 19, 25, 27, 28) se consideran compatibles con la presencia de estructuras grafénicas por la presencia de máximos en la banda G, si bien sería necesario el empleo de algoritmos de análisis espectral más detallado, ya que no se observan con claridad picos que pudieran asignarse al modo vibracional D, en torno a 1344 cm-1 en el patrón rGO. Ello no es sin embargo condición sine qua non para la presencia de estructuras de grafeno., por lo que se han seleccionado estos objetos para el presente informe al mostrar máximos vibracionales compatibles en el entorno de la banda G (rango 1569-1600 cm-1). Existe aún un debate abierto sobre la interpretación de esta banda D y su localización y perfil variable (Ferrari y Robertson, 2004). Como se expuso en la introducción metodológica, la intensidad del pico D, en general citado en torno de 1355 cm-1, así como la relación de intensidad con el pico G (ID /IG) es indicativa del grado de desorden en la malla grafénica, introducido por diferentes agentes como dopado, introducción de muy diversos grupos funcionales o roturas en la continuidad de la malla. En materiales grafíticos ordenados este pico está ausente. En algunos espectros de este subgrupo 2.2. aparecen otros picos con mayores frecuencias (blueshift), cuya asignación al modo vibracional D es posible, aunque esta asignación está aún por determinar mediante el procesamiento con algoritmos de análisis que excede el ámbito del presente trabajo. Por tanto, de momento para estos espectros sólo podemos afirmar que la ausencia o el desplazamiento (shift) del pico D respecto a la localización del patrón rGO precisa aun de una interpretación estructural según los modelos disponibles. Según la literatura, tanto las variaciones en el shift de los picos G y D, como su anchura e intensidad variable, así como la presencia de otros picos presentes en estos espectros podrían deberse a las diversas modificaciones aún por determinar que pueden encontrarse en estos materiales grafénicos, incluyendo grado de desorden, oxidación, dopaje, funcionalización y roturas estructurales. Estas modificaciones exceden el ámbito de estudio del presente informe.

Complementariamente al rango 1200-1800 cm-1, para algunos objetos se amplió el espectro hasta 2800 cm-1 (nº 3, 8 y 11), se detectándose en algunos objetos de este grupo un pico 2D de baja intensidad y amplitud de frecuencia, estando ausente en otros objetos escaneados (datos no mostrados). Sin embargo, tanto en el patrón rGO como en muestreos aleatorios de objetos con máximos de pico G la intensidad de este pico ha resultado siempre muy reducida en comparación con los picos G y D de los espectros, asociados a vibraciones de los carbonos sp2 de los anillos aromáticos. Ello puede deberse a que, en óxidos de grafeno, la intensidad relativa del pico 2D (~2700 cm-1) respecto a los picos G y D aparece muy disminuida. Por ello en este estudio de prospección se ha prescindido en general de analizar el pico 2D por razones de mayor eficacia y empleo de recursos en el escaneo del mayor número posible de objetos en tiempo limitado. En futuros trabajos sería de interés su examen en todos los objetos, estimando con ello la ratio de intensidades I2D/2G en aquellos objetos donde se manifieste mínimamente este


modo vibracional, lo que permite hacer estimaciones sobre el número de capas de la estructura.

Los objetos mostrados en este estudio representan una porción minoritaria respecto al del total de objetos micrométricos visibles a bajo aumento en microscopía óptica de campo claro (100X). Estos objetos fueron escaneados y no se presentan en este estudio por no manifestar espectros compatibles con grafeno al carecer del pico G. Es de gran interés destacar que la mayoría de estos objetos, o quizás por solapamiento de señal con el medio hidrogel donde se encuentran embebidos algunos de ellos, presentan máximos RAMAN en la banda de 1439-1457 cm-1. Igualmente, entre los objetos del grupo 2.2, es frecuente la aparición de un pico prominente en dicha banda, en torno a 1450 cm-1, en combinación con los picos G y D (nº 11, 12, 14, 15, 16, 17, 20, 21, 23, 24, 25, 26 y 28). La asignación de esta banda en torno de 1450 cm-1 está pendiente de realizar, por no corresponder con picos frecuentes en grafeno, pero consideramos es de gran importancia para el conocimiento de la composición de las muestras por su frecuente aparición. Como hipótesis de trabajo, esta banda suele asignarse a los grupos orgánicos metileno –CH2- por doblado del par de hidrógenos- (scissoring o vending). Sin embargo, también se refiere como una banda de intensidad moderada asociable a los anillos aromáticos, por lo que podría asociarse asimismo a grafeno (Ferrari y Robertson, 2004). Otra posible asignación de esta banda sería la de un modo vibracional superpuesto de algún compuesto diferente al grafeno, con mayor probabilidad, o incluso del medio hidrogel remanente tras el secado. Recordemos que en todas las muestras tras la deshidratación a temperatura ambiente siempre queda un remanente viscoso. Este remanente pudiera en muchos casos estar manifestando vibraciones RAMAN solapadas con los objetos que permanecen embebidos en él, no así en los que aparecen fuera del gel en los límites de la zona de arrastre por secado. En este sentido, es posible que este modo vibracional del medio aparezca solapado con los picos G y D del grafeno los espectros del subgrupo 2.1. Está fuera del ámbito de este trabajo la caracterización de este medio, así como de todos los componentes de la muestra. No obstante, existen algunas sustancias capaces de formar esta matriz hidrogel cuyas señales RAMAN muestran modos vibracionales prominentes en torno de esta banda, como por ejemplo alcohol polivinílico (PVA), metilacrilamida, o el polímero PQT-12 (Mik Andersen, https://corona2inspect.blogspot.com/ pers. comm). Se da el caso además de que algunas de estas sustancias se han combinado con grafeno en diseños experimentales que pueden consultarse en la literatura científica, por ejemplo sinapsis artificiales para el PQT-12 (Chen and Huang, 2020), gelatinas para regeneración neuronal combinando metilacrilamida con grafeno (Zhu et al, 2016) o fibras de electrospun de PVA/GO (Tan et al, 2016). Por el momento todas estas hipótesis sobre la asignación de este pico en el entorno de 1450 cm-1 siguen abiertas.

En conclusión, de un total de 110 objetos escaneados se han hallado señales inequívocas de la presencia de óxido de grafeno en 8 objetos, y señales compatibles con la presencia de estructuras grafíticas o de grafeno en otros 20 objetos. El resto de objetos no ha mostrado señales compatibles con grafeno, con espectros en ocasiones


dominados por exceso de ruido causado por excesiva intensidad de fluorescencia, por lo que no podemos definir su asignación por el momento.

Como continuación de esta línea de trabajo, y si bien nuestro análisis micro-RAMAN ha mostrado señales concluyentes de la presencia de objetos con estructura grafénica, para consolidar la certeza en la identificación y profundizar en la caracterización estructural sería conveniente la realización de análisis complementarios mediante técnicas acopladas de microscopía y espectroscopía como la espectroscopia XPS, o difracción TEM.

Para la presente investigación se han obtenido la mayoría de las muestras a partir de viales sellados. Asimismo, durante la extracción de las muestras y su traslado a portaobjetos para la microscopia Raman, se trabajó en condiciones de asepsia bajo campana de flujo laminar. No obstante, la posibilidad de procesos de contaminación de las muestras durante su fabricación, distribución y procesamiento, así como la generalización de estos hallazgos a muestras comparables, deben valorarse mediante muestreos rutinarios y más amplios de lotes similares de estos productos.

Si bien los resultados de este muestreo son concluyentes en cuanto a la presencia de estructuras grafénicas en las muestras analizadas, esta investigación se considera abierta para su continuación y se pone a disposición de la comunidad científica para su replicación y optimización, considerando necesaria su continuación con un estudio espectral más detallado y exhaustivo, basado en un muestreo estadísticamente significativo de viales similares, y la aplicación de técnicas complementarias que permitan confirmar, rebatir, matizar o generalizar las conclusiones de este informe. Las muestras analizadas están adecuadamente custodiadas y a disposición de futuras colaboraciones científicas.


CONCLUSIONES

Se ha realizado un muestreo aleatorio de viales de vacunas COVID19 mediante técnica acoplada micro-RAMAN para caracterizar objetos microscópicos con apariencia grafénica mediante señales espectroscópicas características de la estructura molecular.

La técnica micro-RAMAN permite reforzar el nivel de confianza en la identificación del material mediante el acoplamiento de imágenes y análisis espectral como evidencias observacionales que deben considerarse conjuntamente.

Se han detectado objetos cuyas señales RAMAN por similitud con el patrón inequívocamente corresponden con OXIDO DE GRAFENO REDUCIDO.

Otro grupo de objetos presentan señales espectrales variables compatibles con derivados de grafeno, por la presencia mayoritaria de señales RAMAN específicas (banda G) asignado a la estructura aromática de dicho material, en conjunción con su apariencia visible.

La investigación sigue abierta para su continuación, contraste y replicación. Ulteriores análisis con la técnica descrita u otras complementarias basadas en muestreos significativos permitirían evaluar con significación estadística adecuada el nivel de presencia de materiales grafénicos en estos fármacos, así como su caracterización química y estructural detallada.


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ANEXO 1

VACUNAS COVID19 ARNm objeto de análisis micro-RAMAN

 

 

PFIZER 1 (RD1). Lote EY3014. Sellada

PFIZER 2 (WBR). Lote FD8271. Sellada PFIZER 3 (ROS). Lote F69428. Sellada PFIZER 4 (ARM). Lote FE4721. Sellada

ASTRAZENECA (AZ MIT). Lote ABW0411. Sellada

MODERNA (MOD). Lote 3002183. No sellada JANSSEN (JAN). Lote No disponible. No sellada.

 

MUESTRAS PATRÓN DE GRAFENO

Patrón de oxido de grafeno reducido (rGO) (TMSigma Aldrich. Ref 805424) Patrón de suspensión de OXIDO DE GRAFENO (TMThe Graphene Box)


ANEXO 2

OBJETOS CARACTERIZADOS COMPATIBLES CON ESTRUCTURAS DE GRAFENO GRUPO 1

1      PFIZER 2 WBR UP GO2

2      PFIZER 3 Ros 2hy GO1

3      PFIZER 3 Ros 2hy GO1b

4      PFIZER 3 Ros 2hy b GO2

5      AZ MIT UP CARB1

6      AZ MIT UP CARB4

7      AZ MIT DOWN CARB2

8      MOD grumo1

 

GRUPO 2

9           PFIZER 2 WBR GO1 10 PFIZER 2 WBR GO6a 11 PFIZER 2 WBR 2 GO7

12   PFIZER 2 WBR UP GO1

13   PFIZER 2 WBR UP GO3b

14   PFIZER 2 WBR UP GO4

15   PFIZER 2 WBR DOWN GO2

16   PFIZER 2 WBR DOWN GO3

17   PFIZER 2 WBR DOWN GO5

18   PFIZER 3 ROS OBJ 1

19   PFIZER 3 ROS 2 OBJ 1

20   PFIZER 3 ROS 2 OBJ 2

21   PFIZER 4 Pdown grumo1

22   PFIZER 4 Pdown grumo2

23   PFIZER 4 Pdown grumo3

24   ASTRAZENECA AZ MIT UP CARB5

25   ASTRAZENECA AZ MIT UP CARB6

26   JANSSEN JAN GO1

27   JANSSEN JAN GO3

28   JANSSEN JAN GO4


ANEXO 3. RESULTADOS

 

 

 

Este anexo puede consultarse en el link

 

https://www.researchgate.net/publication/355684360_Deteccion_de_grafeno_en_va cunas_COVID19_por_espectroscopia_Micro-RAMAN


Cuadro de texto: Detección de grafeno en vacunas COVID19
por espectroscopía micro-RAMANCuadro de texto: INFORME TÉCNICOCuadro de texto: ANEXO 3. RESULTADOSCuadro de texto: Almería, España 2 de Noviembre 2021Cuadro de texto: Prof. Dr. Pablo Campra Madrid PROFESOR TITULAR DE UNIVERSIDAD
Doctor en Ciencias Químicas
Licenciado en Ciencias BiológicasCuadro de texto: 1                                       

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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VIALES ANALIZADOS por microRAMAN

 

VACUNAS COVID19 ARNm

PFIZER 1 (RD1). Lote EY3014. Sellada

PFIZER 2 (WBR). Lote Nº FD8271. Sellada PFIZER 3 (ROS). Lote Nº F69428. Sellada PFIZER 4 (ARM). Lote Nº FE4721. Sellada

ASTRAZENECA (AZ MIT). Lote ABW0411. Sellada

MODERNA (MOD). Lote Nº 3002183. No sellada JANSSEN (JAN). Lote No disponible. No sellada.

 

MUESTRAS PATRÓN DE GRAFENO

Patrón de oxido de grafeno reducido (rGO) (TMSigma Aldrich. Ref 805424)

Patrón de suspensión de OXIDO DE GRAFENO (TMThe Graphene Box)

 

 

2










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Espectro RAMAN del patrón de referencia OXIDO DE GRAFENO reducido (DICSATM)

 

-  En el patrón rGO el equipo registra la presencia de 3 picos

característicos:

 

-  Banda G a 1584 cm-1

-  Banda D a 1344 cm-1

-  Banda 2D a 2691 cm-1

 

-     En óxidos de grafeno la intensidad de 2D es normalmente pequeña respecto a G y D.

 

-  Grado de desorden: ID/IG = 346/309 = 1,12

-  Nivel de apilamiento: I2D/IG = 219/309 = 0,70

-  Previamente se calibró el equipo con patrón de silicio a 520

cm-1                                                                                                                           ID/IG = 1,12

 

3


Cuadro de texto: 2.1. GRUPO 1Cuadro de texto: OBJETOS CON SEÑAL RAMAN SIMILAR
AL PATRÓN DE OXIDO DE GRAFENO REDUCIDOCuadro de texto: 4


Cuadro de texto: OBJETOS ANALIZADOS
GRUPO 1Cuadro de texto: 1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.Cuadro de texto: PFIZER 2 WBR UP GO2
PFIZER 3 ROS 2hy GO1b PFIZER 3 ROS 2hy b GO2 PFIZER 3 ROS2 HY GO1 AZ MIT UP CARB 1
AZ MIT UP CARB4
AZ MIT DOWN CARB2
MOD grumo1Cuadro de texto: 5














Cuadro de texto: 1. PFIZER 2
WBR UP GO2





 


Cuadro de texto: 1. PFIZER 2
WBR UP GO2Cuadro de texto: ID/IG = 1,18 















Cuadro de texto: 8






Cuadro de texto: GO1


Cuadro de texto: 2. PFIZER 3




Cuadro de texto: ROS 2 HY


 











Cuadro de texto: 9





Cuadro de texto: 2. PFIZER 3Cuadro de texto: ROS 2 HYCuadro de texto: GO1

 
















Cuadro de texto: 10







Cuadro de texto: GO1


Cuadro de texto: 2. PFIZER 3




Cuadro de texto: ID/IG = 1,22




Cuadro de texto: ROS2 HY


 


Cuadro de texto: 3. PFIZER 3 Ros 2hy GO1bCuadro de texto: 11

 





Cuadro de texto: 3. PFIZER 3
Ros 2hy GO1bCuadro de texto: 12

 


















Cuadro de texto: 13







Cuadro de texto: 3. PFIZER 3
Ros 2hy GO1b



Cuadro de texto: ID/IG = 1,22

 


Cuadro de texto: 4. PFIZER 3 Ros 2hy b GO2Cuadro de texto: 14





Cuadro de texto: 4. PFIZER 3 Ros 2hy b GO2Cuadro de texto: 15                      


Cuadro de texto: 4. PFIZER 3
Ros 2hy b GO2Cuadro de texto: ID/IG = 1,03Cuadro de texto: 16


Cuadro de texto: 5. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB1Cuadro de texto: 17                             


Cuadro de texto: 5. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB1Cuadro de texto: ID/IG = 1,07Cuadro de texto: 18


Cuadro de texto: 6. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB4Cuadro de texto: 19                        















Cuadro de texto: 20







Cuadro de texto: 6. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB4



Cuadro de texto: ID/IG = 1,14

 


Cuadro de texto: 7. ASTRAZENECA
AZ MIT DOWN 2 CARB2Cuadro de texto: 21                           


Cuadro de texto: 7. ASTRAZENECA
AZ MIT DOWN CARB2Cuadro de texto: 22

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 





Cuadro de texto: 8. MODERNA
MOD grumo1Cuadro de texto: 23


Cuadro de texto: 8.Cuadro de texto: MODERNACuadro de texto: MOD grumo1Cuadro de texto: ID/IG = 1,11Cuadro de texto: 24


Cuadro de texto: 2.2. GRUPO 2:
OBJETOS CON SEÑALES COMPATIBLES CON ESTRUCTURAS DE GRAFITO, GRAFENO Y DERIVADOSCuadro de texto: 25


 

 

 

 

 

OBJETOS ANALIZADOS GRUPO 2

 


9                           PFIZER 2 WBR GO1

10                       PFIZER 2 WBR GO6a

11                       PFIZER 2 WBR 2 GO7

12                       PFIZER 2 WBR UP GO1

13                       PFIZER 2 WBR UP GO3b

14                       PFIZER 2 WBR UP GO4

15                       PFIZER 2 WBR DOWN GO2

16                       PFIZER 2 WBR DOWN GO3

17                       PFIZER 2 WBR DOWN GO5

18                       PFIZER 3 ROS OBJ 1

19                       PFIZER 3 ROS 2 OBJ 1

20                       PFIZER 3 ROS 2 OBJ 2


21                       PFIZER 4 Pdown grumo1

22                       PFIZER 4 Pdown grumo2

23                       PFIZER 4 Pdown grumo3

24                       ASTRAZENECA AZ MIT UP CARB5

25                       ASTRAZENECA AZ MIT UP CARB6

26                       JANSSEN JAN GO1

27                       JANSSEN JAN GO3

28                       JANSSEN JAN GO4

 

 

 

 

 

 

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26/53Cuadro de texto: afirma.ual.esCuadro de texto: Zv/OreWR6oN6XEyA2lP8Fg==Cuadro de texto: Zv/OreWR6oN6XEyA2lP8Fg==
 


Cuadro de texto: 1600 cm-1Cuadro de texto: 9. PFIZER 2
WBR GO1Cuadro de texto: WBR

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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Cuadro de texto: 10. PFIZER 2
WBR GO6aCuadro de texto: WBRCuadro de texto: 28

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 





Cuadro de texto: 11. PFIZER 2
WBR2 GO7Cuadro de texto: 29                                     


Cuadro de texto: 11. PFIZER 2
WBR GO 7Cuadro de texto: WBRCuadro de texto: ID/IG = 0,48Cuadro de texto: 30

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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Cuadro de texto: 11. PFIZER 2
WBR GO7 (1200-2800 cm)Cuadro de texto: GCuadro de texto: DCuadro de texto: 31


Cuadro de texto: 12. PFIZER 2
WBR UP GO1Cuadro de texto: WBR













Cuadro de texto: 33







Cuadro de texto: 13. PFIZER WBR UP GO3b
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 










Cuadro de texto: 34



Cuadro de texto: WBR


Cuadro de texto: 14. PFIZER 2 WBR UP GO4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


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Cuadro de texto: 15. PFIZER 2
WBR DOWN GO2Cuadro de texto: Foto N/A 


Cuadro de texto: 16. PFIZER 2
WBR DOWN GO3Cuadro de texto: WBR     


Cuadro de texto: 17. PFIZER 2
WBR DOWN GO5   




Cuadro de texto: 18. PFIZER 3
Ros OBJ 1Cuadro de texto: 38
 


Cuadro de texto: 19. PFIZER 3
ROS 2 OBJ 1Cuadro de texto: 39

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 





Cuadro de texto: 20. PFIZER 3
ROS 2 OBJ2Cuadro de texto: 40

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 











Cuadro de texto: 41


Cuadro de texto: 21. PFIZER 4: Pdown grumo1













Cuadro de texto: 42







Cuadro de texto: 21. PFIZER 4:
Pdown grumo1
 



Cuadro de texto: 22. PFIZER 4
Pdown grumo2Cuadro de texto: 43
 















Cuadro de texto: 44







Cuadro de texto: ID/IG = 0,58


Cuadro de texto: 22. PFIZER 4
Pdown grumo2

 







Cuadro de texto: 45

Cuadro de texto: 23. PFIZER 4
Pdown grumo 3

 


Cuadro de texto: 23. PFIZER 4
Pdown grumo 3Cuadro de texto: 46




Cuadro de texto: 24. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB5Cuadro de texto: 47
 


Cuadro de texto: 24. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB5Cuadro de texto: ID/IG = 0,59Cuadro de texto: 48                   








Cuadro de texto: 49

Cuadro de texto: 25. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB6

 


Cuadro de texto: 25. ASTRAZENECA
AZ MIT UP CARB6Cuadro de texto: 50


Cuadro de texto: 26. JANSSEN
JAN GO1 





Cuadro de texto: 27. JANSSEN
JAN GO3                                

 

 





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JAN GO4     

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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Fecha

02/11/2021

 


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INFORMES Y PUBLICACIONES CIENTÍFICAS SOBRE LA TOXICIDAD DEL ÓXIDO DE GRAFENO EN LOS SERES VIVOS Y EN EL SER HUMANO EN PARTICULAR

1-  El óxido de grafeno genera trombos: https://www.researchgate.net/publication/328338305_Graphene_Oxide_Touches_Blo od_In_Vivo_Interactions_of_Bio-Coronated_2D_Materials

2-  El óxido de grafeno genera coagulación de la sangre: http://vu2004.admin.hosting8.ing.udec.cl/Proyectos/investigacion-con-grafeno-con- aplicaciones-hemostaticas/

3-  Toxicidad de las nanopartículas de la familia del grafeno: una revisión general de los orígenes y mecanismos:

https://particleandfibretoxicology.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12989-016- 0168-y

4-  Toxicidad del grafeno en el esperma humano:

https://francis.naukas.com/2016/08/21/toxicidad-del-grafeno-y-los-nanotubos-de- carbono-en-el-esperma-humano/

5-  Los peligros del grafeno y sus efectos secundarios en la biología humana: https://computerhoy.com/noticias/hardware/peligros-del-grafeno-sus- efectos-secundarios-12591

6-  Nanomateriales de grafeno: síntesis, biocompatibilidad y citotoxicidad: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6274822/

7-  Nanotoxicología: Respirar nanotubos de carbono produce fibrosis pulmonar, una causa de cáncer de pulmón: https://francis.naukas.com/2009/10/29/nanotoxicologia-respirar-nanotubos-de- carbono-produce-fibrosis-pulmonar-una-causa-de-cancer-de-pulmon/

8-  Evaluación de la seguridad de los materiales a base de grafeno: enfoque en la salud humana y el medio ambiente: https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acsnano.8b04758#

 

 

 

9-  El óxido de grafeno es detectado en el cuerpo por células especializadas del sistema inmunológico causando la misma sintomatología que el supuesto "SARSCOV2": https://www.graphene- info.com/graphene-oxide-detected-body-specialized-cells-immune-system

10-  Toxicidad del grafeno en células pulmonares humanas normales:


https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21485826/

11-  ¿Pueden los nanomateriales inducir toxicidad reproductiva en mamíferos machos?: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0048969720378852

12-  El óxido de grafeno afecta el resultado de la fertilización in vitro al interactuar con la membrana del esperma en un modelo animal: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0008622317312757#undfig1

13-  Efectos del óxido de nanografeno en los testículos, el epidídimo y la fertilidad de las ratas Wistar: https://www.researchgate.net/publication/315776736_Effects_of_Nano- Graphene_Oxide_on_Testis_Epididymis_and_Fertility_of_Wistar_Rats

14-  La nano-interacción del óxido de grafeno induce la inhibición de la espermatogénesis y la alteración del metabolismo de los ácidos grasos en el nematodo Caenorhabditis elegans: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30218681/

15-  El óxido de grafeno toca la sangre: interacciones in vivo de materiales 2D con efecto "Corona biológica": https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2019/nh/c8nh00318a#!divAbstract

16-  Toxicidad del grafeno en el esperma humano y consecuencias: https://francis.naukas.com/2016/08/21/toxicidad-del-grafeno-y-los-nanotubos-de- carbono-en-el-esperma-humano/

17-  El óxido de grafeno puede inducir mutagénesis (cáncer) in vitro e in vivo: https://www.nature.com/articles/srep03469

18-  La exposición repetida al óxido de grafeno en aerosol media la inhibición de la autofagia y la inflamación en un modelo tridimensional de las vías respiratorias humanas: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2590006420300107?via%3Dihub #fig5

19-  La exposición única a nanoplaquetas de óxido de grafeno y grafeno en aerosol no inició una respuesta biológica aguda en un modelo de pulmón humano en 3D: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0008622318304706?via%3Dihub #undfig1

20-  Propiedades físico-químicas basadas en la toxicidad diferencial del óxido de grafeno / óxido de grafeno reducido en células pulmonares humanas mediada por estrés oxidativo:


https://www.nature.com/articles/srep39548

21-  Una evaluación de los efectos citotóxicos de las nanopartículas de grafeno en las células epiteliales del pulmón humano: https://journals.sagepub.com/doi/10.1177/0748233718817180

22-  Papel de la carga superficial y el estrés oxidativo en la citotoxicidad y genotoxicidad del óxido de grafeno hacia las células de fibroblastos de pulmón humano: https://analyticalsciencejournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jat.2877

23-  Las nanopartículas de grafeno inducen la apoptosis en las células MCF-7 a través del daño mitocondrial y la vía NF-KB: https://iopscience.iop.org/article/10.1088/2053-1591/ab33af

24-    Toxicidad del óxido de grafeno y los nanotubos de carbono de paredes múltiples contra las células humanas y el pez cebra: https://link.springer.com/article/10.1007/s11426-012-4620-z

25-    Una evaluación de la citotoxicidad in vitro de nanohojas de grafeno en células alveolares: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0169433217335109?via%3Di hub

26-  Las nanoláminas de grafeno dañan las membranas lisosomales y mitocondriales e inducen la apoptosis de las células RBL-2H3: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0048969720327467?via%3Di hub

27-  Genotoxicidad de nanocintas de grafeno en células madre mesenquimales humanas: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0008622312009499?via%3Di hub

28-  Efectos genotóxicos y epigenotóxicos diferenciales de los nanomateriales de la familia del grafeno (GFN) en las células epiteliales bronquiales humanas: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1383571816300262?via%3Di hub

29-  Una mirada más cercana a la genotoxicidad de los materiales basados en grafeno: https://iopscience.iop.org/article/10.1088/2515-7639/ab5844

30-  Fusión del ADN y genotoxicidad inducida por nanopartículas de plata


y grafeno: https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.chemrestox.5b00052

31-  Los puntos cuánticos de grafeno hidroxilado inducen daño en el ADN y alteran la estructura de los microtúbulos en las células epiteliales del esófago humano: https://academic.oup.com/toxsci/article/164/1/339/4970755

32-    Las nanohojas de óxido de grafeno inducen daño en el ADN y activan la vía de señalización de reparación por escisión de bases (BER) tanto in vitro como in vivo: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0045653517309517?via%3Di hub

33-    Respuesta genotóxica y recuperación de daños de macrófagos a puntos cuánticos de grafeno: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0048969719304073?via%3Di hub

34-    ¿Pueden los puntos cuánticos de grafeno dañar el ADN de las células?: https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2015/NR/C5NR01734C

35-  La exposición de la sangre al óxido de grafeno puede causar muerte anafiláctica en primates: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1748013220300918?via%3Dihub

36-  Información mecanicista celular y molecular sobre el potencial de daño del ADN del grafeno de pocas capas en las células endoteliales primarias humanas: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1549963416000848?via%3Di hub

37-  Impacto del óxido de grafeno en la viabilidad, funcionalidad e integridad de barrera del trofoblasto placentario humano: https://iopscience.iop.org/article/10.1088/2053-1583/aab9e2

38-  PEGilación de Reducción de grafeno óxido induce toxicidad en células de la barrera hematoencefálica: An en Vitro y en Vivo Study: https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.molpharmaceut.6b00696

39-  Daño del ADN relacionado con el contenido de oxígeno del óxido de grafeno en las células del epitelio pigmentario de la retina humana: https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10856-021-06491-0

40-  Efectos de citotoxicidad del grafeno y los nanotubos de carbono de pared simple en células PC12 derivadas del feocromocitoma neural:


https://pubs.acs.org/doi/10.1021/nn1007176

41-  Evaluación de la toxicidad celular inducida por óxido de grafeno y análisis de transcriptomas en células renales embrionarias humanas: https://www.mdpi.com/2079-4991/9/7/969

42-    Estudio de toxicología de nanotubos de carbono de pared simple y óxido de grafeno reducido en espermatozoides humanos: https://www.nature.com/articles/srep30270

43-   Efectos dependientes de la dosis del óxido de grafeno a nanoescala sobre la capacidad de reproducción de los mamíferos: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0008622315301366?via%3Di hub

44-   La exposición in vivo a corto plazo al óxido de grafeno puede dañar el intestino y los testículos: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0304389417300171?via%3Di hub

45-  Citoxicidad y genotoxicidad del óxido de grafeno y láminas de óxido de grafeno reducidas en espermatozoides: https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2014/RA/c4ra01047g

46-  Posibles efectos adversos de las nanopartículas en el sistema reproductivo: https://www.dovepress.com/potential-adverse-effects-of- nanoparticles-on-the-reproductive-system-peer-reviewed-fulltext-article-IJN

47-  Evaluación del potencial tóxico de los nanomateriales de la familia del grafeno: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1021949814000106?via%3Dihub

48-  Nanotoxicidad del grafeno y el óxido de grafeno:

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/tx400385x

49-  La toxicidad del grafeno como arma de doble filo de riesgos y oportunidades explotables: un análisis crítico de las tendencias y desarrollos más recientes: https://iopscience.iop.org/article/10.1088/2053- 1583/aa5476

50-  Un efecto diferencial del óxido de grafeno sobre la producción de citoquinas proinflamatorias: https://www.worldscientific.com/doi/abs/10.1142/S1682648515500110

51-  El óxido de grafeno interrumpió la homeostasis mitocondrial al inducir la desviación redox intracelular y la disfunción de la red


autofagia-lisosómica en las células SH-SY5Y:

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304389421011225?via%3Dihub

52-  Biodistribución y toxicidad pulmonar del óxido de grafeno instilado por vía intratraqueal en ratones: https://www.nature.com/articles/am20137

53-    Revisión de los estudios de toxicidad de los nanomateriales basados en grafeno en animales de laboratorio: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0273230017300119?via%3Di hub

54-  Los neutrófilos degradan el óxido de grafeno mediados por la mieloperoxidasa: https://www.researchgate.net/publication/351888431_Neutrophils_Defensively_Degr ade_Graphene_Oxide_in_a_Lateral_Dimension_Dependent_Manner_through_Two_ Distinct_Myeloperoxidase_Mediated_Mechanisms

55-  Toxicidad aguda ampliada y farmacología de seguridad para formulaciones de nanopartículas de grafeno funcionalizadas administradas por vía intravenosa: http://europepmc.org/article/MED/24854092

56-  Control de la actividad cardíaca de un ser vivo de forma remota usando grafeno: https://www.infosalus.com/asistencia/noticia-manejan-celulas- cardiacas-cultivadas-laboratorio-control-remoto-20180522073436.html

57-  El óxido de grafeno administrado por vía intramuscular se acumula en pulmones provocando toxicidad pulmonar y muerte por granuloma: https://link.springer.com/article/10.1557/jmr.2017.388

58-  El rGO (óxido de grafeno reducido) provoca una respuesta huesped- viral en el sistema inmunológico como si de un patógeno se tratase: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0142961213012088

59-  El óxido de grafeno induce la muerte celular apoptótica en las células endoteliales activando la autofagia: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1742706116304810

60-  Daño en el ADN del grafeno de pocas capas en las células endoteliales primarias humanas: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1549963416000848

61-  Múltiples efectos de la toxicidad del óxido de grafeno en interacción con células de mamíferos:


https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169409X16302411#f0025

62-  Nefrotoxicidad del grafeno en los riñones:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27043588/

63-  Toxicología de los nanotubos de carbono y los fullerenos:

https://copro.com.ar/Toxicologia_de_los_fullerenos.html

64-  El desconcertante potencial de los nanomateriales de carbono: propiedades generales, aplicación y toxicidad: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7466546/

65-  Síntesis y toxicidad de nanopartículas de óxido de grafeno (Mutagenicidad ambiental y carcinogenicidad): https://www.hindawi.com/journals/bmri/2021/5518999/

66-  Características de radiofrecuencia del óxido de grafeno:

https://aip.scitation.org/doi/abs/10.1063/1.3506468

 

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PAGINA DE HORDASHISPANICAS R/EVOLUCION

Contrainformacion e investigacion,comprueba todos los enlaces y nunca des nada por sentado,RNWO:

AGENDA NWO-ILLUMINATI Y LA III GUERRA MUNDIAL


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ZAPATERO MASON- ILLUMINATI GRADO 33:





“El jefe del Ejecutivo, José Luis Rodríguez Zapatero, pertenece a la Masonería.Mason grado 33. Así lo asegura el historiador Ricardo de La Cierva, que ha dedicado numerosos estudios a esta sociedad secreta. "

Saludos y diferentes poses ante los medios,en este caso con el tipico apreton de manos entre masones, desvelando tambien al influencia sobre el mismo Vaticano, les deletan como otro miembro de las sociedades secretas, como lo es tambien el ex-presidente Jose maria aznarMason grado 33 en la sociedad SKULL & BONES:Mas info aqui.







Manfestacion ante el club bilderberg un ejemplo de compromiso y activismo pacifico, todo un ejemplo que nos tiene que servir de inspiracion, mas info AQUI


DESPIERTA Y AYUDA A DESPERTAR
RNWO

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La Unión Europea aprobó el día 5 de noviembre que las autoridades administrativas de los Estados miembros puedan cortar el acceso a Internet sin orden judicial previa


Continua AQUI


11M Operacion de falsa bandera al descubierto:OTAN-CMX

La denuncia de Mario Gascon[Confidente del 11-m y detenido en honduras acusado de espionaje "chacales del CNI Español]

Mario Gascon quien trabajo y a la vista de las ultimas informaciones continuaba haciendolo para el gobierno del sicario de los NWO zapatero,pues bien hizo la siguiente deunicia no solo publica en un medio de difusion tambien la presento ante la audinecia nacional y adivinen cual fue la respuesta de esta, carpetazo al mas piro estilo FASIAN:

Ha declarado que:

"El Chino le confesó que el 11-M se organizó con ayuda del CNI y los vascos". Esto mismo lo denunció por escrito en la Audiencia Nacional, pero nadie le hizo caso y se volvió a marchar fuera de España.

CONTINUA AQUI


LEY DEL SILECIO 11M: El obstruccionismo de Interior dilata el proceso contra Sánchez Manzano:

En los últimos días hemos sabido que el Ministerio del Interior ha denegado a las víctimas del 11M el protocolo de actuación de los TEDAX, petición que se enmarca en la fase de instrucción de la querella interpuesta por la Asociación de Ayuda a las Víctimas del 11M contra el que fuera comisario jefe de la Unidad Central de Tedax y NBQ, Juan Jesús Sánchez Manzano, y contra la jefa de laboratorio de dicha unidad



CANALES CENSURADOS EN YOUTUBE:

Otro canal censurado, en este caso las connotaciones claramente politicas, se trata del canal del youtube caballero ZP Tele 5 al parecer ha influido decididamente en la decision, ya que, este canal se caracterizaba con ser muy critico con los tiranos que nos gobiernas, inclinaciones politicas a un lado, yo personalmente no creo en ninguna, este tipo de censuras a dedo en un supuesto canal libre como el YOUTUBE,LA cesura en YOURUBE es una constante, desde que millones de personas han despertado y publican videos incomodos sobre los verdaderos planes de los Illuminati y su NWO, Desde aqui nos solidarizamos con todos los canales y videos censrados, seguiremos resistiendo para que los videos por la verdad y libertad continuen en sus redes.CENSURA S/ZIONISTAS $$NWO$$ EN YOUTUBE, CAZACHAMUCOS 2006katecon TRUTHEXPOSED001,


Hacer canales de refuerzo, subir los videos en varios canales asi sera muy dificil que perdais la informacion, pensar que se toman tantas molestias en censuraros porque vuestra informaicon molesta incomada al sistema NWO, NO PERMTAIS QUE OS SILENCIEN LIBERTAD Y RNWO.



TeleCIRCO censura , la cadena de TV, telecinco emite programas como GH, gran hermano, programacion illuminati,programacion de bajo nivel de contenidos puro entretenimiento para masas, programaicon rozando la ilegalidad en algunos casos, cumpliendo los obejtivos de la mafia illumianti para someter a la poblacion a la tirania de la friboldad y la programacion vacia de contenidos, videos incomodos, periodistas y medios de comunicacion "marionestas" Illuminati.

video por apologia al terrorismo en TELECIRCO.Ver video integro aqui.

VIDEO INCOMODO SOBRE LA DEMOLICION DE LAS TORRES GEMELAS Ver video: aqui

6 Videos CENSURADOS DE GOLPE/Daniel Estulin en la Noria,todos los videos en vimeo para ver los videos pinchar enlace.


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11M/$ autoatentados consentidos por politicos y medios de comuniacion:

Evidencias cientificas de la demolicion de las torres

No nos merecemos un gobierno que nos mienta.
NOS ENGAÑARON A TODOS.
Operacino de bandera falsa OTAN CMX 11-M


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Image and video hosting by TinyPicEXTREMADAMENTE GRAVE:Image and video hosting by TinyPic

Gobiernos y organismo internacionales implicados en una trama de controlar la poblacion mundial,

Mas informacion AQUI:

GRIPE A. La Vacuna: Crimen sin resolver


Baxter y su agenda genocida DENUNCIA EL GENOCIDIO!!!!!Image and video hosting by TinyPic
Dr. Moshes, detenido en una espectacular persecución por denunciar hace meses una trama vírica en Ucrania”
supresión de esta información por parte de los medios de comunicación de masas.
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Leer mas aqui

HAARP ARMA ILLUMINATI EN CHILEy HAITI:Image and video hosting by TinyPic


Un autentico genocidio de proporciones atroces, lo hicieron en Haiti mas de 200.000 vidas humanas, y repitoeron en Chile, patrones repetdos estudios cientificos avalan el uso del arma HAARP, patente de EU y denunciada en la comision europea.



por hordashispanicas



La única forma de generar patrones sucesivos de profundidad idéntica, en réplicas discontinuas seguidas, es proyectando desde un satélite frecuencias de superficie, concentradas en un punto. No hay otra manera de conseguir ese efecto, ya que, los seísmos endógenos, obedecen a las propiedades de elasticidad de las placas Tectónicas, y ni en esta ocasión, ni en el caso de Haití, se ha verificado elasticidad alguna. Por tanto

ARTIFICIAL.UN ASESINANATO EN MASA, UN GENOCIDIO, DEL QUE TIENE QUE RENDIR CUENTAS TODOS SUS RESPONSABILIDADES

ES HORA DE ACTUAR Y DE MOVILIZARSE SIN VIOLENCIA,INFORMANDO DE LO QUE STA PASANDO

Arituclos del Blog HORDASHISPANICAS:

la verdad sobre las vacunas

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GRIPE 1H1N.IMPLANTACION MASIVA DEL MICROCHIP



(Nosotros ya lo dijimos, se confirman las peores sospechas).
No permitas que te marquen como al ganado:

Científicos de la Universidad de Colorado han creado un chip capaz de identificar una mutaciónd el virus de la gripe aviar en sólo 11 horas. Ha sido probado con cepas específicas de otros virus de la gripe y ha funcionado en más del 90% de los casos. Los actuales métodos de diagnóstico tardan cuatro días en identificar las características genéticas de los virus, por lo que el chip, bautizado como Flu Chip o Chip de la Gripe, puede convertirse en una poderosa herramienta para prevenir y evitar futuras epidemias y pandemias. Por Yaiza Martínez de Tendencias Científicas.


la tecnologia lleva desarrolada desde hace años, y probada con exito en animales, el paso anterior para controlar a los humanos.


Epidemias y pandemias (como la que advierte la ONU sobre la gripe aviar) podrían ser detectadas en cuestión de horas en organismos humanos infectados gracias a un chip desarrollado por la universidad estadounidense de Colorado, en Boulder. Este chip es capaz de reconocer las características genéticas de cepas específicas de diversos tipos de gripe. Ya ha sido probado, con un elevado porcentaje de aciertos (más del 90%), para detectar tres virus de la gripe.



nos convertiriamos en un simple codigo, sin privacidad.


Según explica la citada universidad en un gripe española, por lo que la aparición de este chip puede cambiar la naturaleza de esta amenaza.


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En la cartas de Steve Jackson(1995)ya se hablaba de ello.

Los escenarios plausibles de la nueva pandemia son devastadores: se calcula que entre el 20% y el 50% de la población mundial estaría afectada y que morirían entre el 10% y el 50% de los enfermos.


Fuente de la noticia:http://www.laflecha.net/canales/ciencia/noticias/200511132



Bolitin 19. Armas para defender la salud:

http://www.amcmh.org/PagAMC/downloads/gripecerdo3.htm

Esta es la noticias, sobran comentarios, todo queda dicho, aunque la noticia sea del 2005, habla claramente de las oscuras y siniestras intenciones de los gobernantes mundiales, y como llevan desde hace años con una sola idea, un gobierno mundial y posteriormente su implantación masiva de un micro-CHIP a toda la población, campañas agresivas sobre la desaparición de niños, supuestas facilidades económicas y descuentos para quienes los usen, darán todo tipo de facilidades pero tienes que revelarte y decir alto y claro NO AL MICRO -CHIP en humanos, seria como tener un ganado controlado con su marca, la marca de un mundo mas tiranos, mas controlado y con menos Libertad, un NWO el de los illuminatis

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Obama satanico-ILLUMINATI???

Obama satanico-ILLUMINATI???
No es un truncaje, y no solo esta el

Bush satanico.ILLUMINATI???

Bush satanico.ILLUMINATI???
En realidad aparte de ser un culto a satan es un simbolo muy usado por una sociedad secreta.Los illuminati.Demasiadas evidencias para ser una casulidad no crees?

SIMBOLOGIA ILLUMINATI

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Para entender lo que esta pasando es muy importante que sepas leer la simbología, para ellos, algo mas que sagrado, una deuda, una devoción enfermiza, que les delata y nos tendría que hacer recapacitar sobre a quienes dejamos que nos gobiernen.Puedes informarte mejor aqui:

Politicos, empresarios, famosos usnado la simbologia illuminati

Enlace video

Funeral Illuminati.Lady Bird Jhonson

SIMBOLOGIA ILLUMINATI



Quien era Lady Bird Johnson

Para entender como actuan los illuminati

Politicos y famoso declarandose publicamentes seguidores de ls illumianti.pruebas graficas


No cabe duda despues de ver este video, no podemos mas que reaccionar y ante la evidencia y contundencia de los hechos, anilazr la perspectiva geo-politica que hasta hora teniamos, la contundencia de las imagenes habla por si sola, vemos a un grupo importante de politicos y empresarios asistentes al funeral, esto no tendira mayor importancia si no fuera por lo esperpentico del acto en si, curas y miembros de la iglesia realizando un gesto mas que sospechoso, una adoracion y una esaltacion preocupantes.

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Recuerda que esta gente tiene cargos politicos y esta elegida democraticamente, seguramente no sabais este pequeño secreto que teneian y su adoracion al maligno tampoco es un dato que nos recuerden en sus campañas de captacion de votos


DESPIERTA!!!!QUIEREN CAMBIAR EL MUNDO Y YA ESTASVIENDO QUIEN ES SU DIOS!!!!



Informate sobre lo que esta pasando y reacciona, se trata de tu libertad lo mas sagrado e importante que tenemos, informate saca tus propias conclusiones puede que este equivocado, pero cuestiona la autoridad, contrasta la informacion y busca la



VERDAD:

Simbologia illumianti ralacion directa con corrientes satanicas y su simbologia

Quienes son los siervos de satan?

Ritual Stanico de Los Bohemian Grove:
Advertencia:Este video contiene imagenes que podrian herir su sensibilidad, escenas realmente duras y macabras.


Este extraordinario documento fue filmado por el periodista e investigador Alex Jones, lo mas aterrador de todo esto es la representación y el fanatismo que presentan sus asistentes, recordando ritos que se remontan a mas de 3000 años de antigüedad, esto es un documento grafico en toda regla, una prueba mas de lo que realmente esta pasando, la realidad siempre supera a la facción, pero lo peor de todo no seria solo esto:

Si revisamos y nos documentamos sobre los Bohemian Grove, simplemente pueden documentarse en este enlace

http://en.wikipedia.org/wiki/Bohemian_Grove y

http://www.infowars.com/bg1.html

Algunos miembros de la BG:

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Jimmy Carter
,George H.W. Bush,George W. Bush (hijo), Henry Kissinger, George Schultz

Entre otros....podemos hablar de miembros de importantes empresas, multinacionales, políticos como hemos visto de diferentes ideologías(controlan todas para asegurarse el exito), banqueros, artistas...etc...etc

No olvidemos que los Bohemian, es una rama dependiente de los ILLUMIANTI, la relación entre lo perverso y lo maléfico, así como, la adoración y culto que tienen estos fanáticos satanistas esta mas que demostrada.

Despues de ver este video, ya nunca diras YES WE CAN!!!

Confesiones de un Ganster Economico (3) John Perkins

Parte de la historia censurada,Esta parte a que nunca te la enseñaron en la escuela?

Declaracion de intenciones.Libertad y RNWO.15 de octubre de 1940,)

un comico muy serio

Listas de reproduccion.

A dia de hoy, Internet es el unico espacio realmente libre que nos queda, sin intervención de las grandes multinacionales y banqueros.Proyecto HAARP, operation black jack, annunaki, nibiru, skull and bones, bohemian grobe, sabias que estas sociedades tienen su punto de conexion con los Illuminati, estos controlaracion todas las demas, creando un entrazado muy complejo de sociedades y organizaciones, así, pueden controlar todos las partes de nuestra sociedad, hasta el Vaticano cayo en su dominio,VER CRUZ TORCIDA , ha sido lo que han estado esperando durante siglos, derrocar a la iglesia y su concepto del bien y del mal, imponiendo su NWO, nuevo orden mundial, un solo mundo bajo sus reglas y creencias satánicas, considerando al ser humano como un siervo, una raza inferior que esta aquí para servirles, os acordáis de la edad media?efectivamente nunca fueron mas felices teniendonos como autenticos esclavos a su servicio con derechos divinos y con la unica esperanza de sobrevivir, pero la lucha, la revolución y el despertar de nuestros antepasados hicieron posibles alguna conquistas sociales, que hoy perdemos poco a poco,no podemos permitir que suceda.


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Evolucion del virus de la libertad.RNWO Juntos venceremos!!!

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